转染技术是分子生物学研究中不可或缺的工具，它通过将外源核酸（如DNA、RNA）导入细胞，帮助研究者探索基因功能、重组蛋白表达或基因治疗开发。然而，无论是化学转染试剂、电穿孔法还是病毒载体，实验过程中总会面临细胞类型适配性、转染效率不稳定或细胞毒性等挑战。本篇文章将针对转染的常见问题，以简明问答形式梳理关键知识点，助您快速攻克实验瓶颈，提升研究可重复性。
一、转染效率低
1. 细胞状态不佳
原因：细胞生长状态差、细胞密度不合适或细胞老化。
解决方案：确保细胞处于对数生长期，贴壁细胞的汇合度为70%-90%，悬浮细胞密度适中。定期传代细胞，避免细胞老化。
2. 核酸质量问题
原因：核酸纯度不足或降解。
解决方案：检查核酸的纯度和完整性，避免使用降解的核酸。使用高质量的核酸提取试剂盒，实验过程中全程使用无酶耗材，确保核酸不会降解。
3. 转染条件未优化
原因：转染复合物形成条件不当、转染试剂与核酸的比例不合适或者转染时间不够。
解决方案：根据细胞类型和转染试剂说明书优化转染条件，包括核酸和转染试剂的用量、孵育时间等。进行预实验，确定最佳条件。
4. 转染方法或者转染试剂不合适
原因：某些细胞类型对转染方法敏感
解决方案：根据细胞类型选择合适的转染方法（如脂质体转染、电转染等）。对于难转染细胞，可尝试使用病毒载体或优化转染条件。
二、细胞死亡率高
1. 转染试剂毒性
原因：转染试剂或核酸用量过高。
解决方案：通过预实验确定最佳的转染试剂和核酸用量，避免过量使用。
2. 转染过程中的抗生素干扰
原因：转染过程中使用抗生素。
解决方案：转染时避免使用抗生素，尤其在脂质体转染中。
3. 细胞状态差
原因：细胞生长状态不佳或存在污染。
解决方案：确保转染前细胞生长状态良好，无污染。定期更换培养基，保持细胞健康。
4. 转染方法或参数不当
原因：电转染参数设置不当或转染复合物形成不完全。
解决方案：优化电转染参数，如电压、脉冲时间和脉冲次数。确保转染复合物充分形成后再加入细胞。
三、转染重复性差
1. 转染参数不稳定
原因：细胞密度、转染试剂用量、孵育时间等参数波动。
解决方案：严格控制每次实验的转染参数，确保一致性。
2. 细胞状态不稳定
原因：细胞传代次数过多或细胞亚系差异。
解决方案：定期复苏细胞，使用传代次数较少的细胞进行实验。如果可能，选择转染效率更高的细胞亚系。
四、其他问题
1. 转染后检测时间不当
原因：检测时间过早或过晚。
解决方案：根据转染方法和细胞类型，合理安排检测时间。瞬时转染后，一般建议48小时后进行qPCR检测，48-72小时后进行蛋白检测。
2. 转染复合物配制问题
原因：使用了不合适的培养基或试剂。
解决方案：通常使用无血清培养基配制转染复合物，除非转染试剂说明书允许使用含血清培养基。
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产品应用 |
产品名称 |
产品货号 |
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